Spektrophotometrische Kinasen-Aktivitätsassays

Biaffin bietet umfassende Kinase-Aktivitätsanalysen über spektrophotometrische Assays an. Die Methode koppelt die Umsetzung von ATP zu ADP mittels Kinasen an einen NADH verbrauchenden enzymatischen Prozeß, der von Pyruvatkinase und Laktatdehydrogenase katalysiert wird. Dabei wird equivalent zur Umsetzung von ATP durch die Kinasereaktion NADH oxidiert. Dieser Oxidationsprozess kann bei 340 nm spektrophotometrisch verfolgt werden, da nur die reduzierte Form von NAD bei dieser Wellenlänge ein Absorptionsmaximum aufweist. Durch Auftragen der initialen Änderung der Absorption gegen die Zeit berechnet sich die spezifische Aktivität der zu untersuchenden Kinase. Der Assay wird im 96er Mikrotiterplatten-Format durchgeführt. Zusätzlich zur Bestimmung von der spezifischen Kinaseaktivität können auch kinetische Konstanten berechnet werden.